Vad är ett Northern blot?

Northern blot hybridization är en teknik som används för att påvisa budbärar-RNA (mRNA) nivåer i ett prov, och att kvantifiera hur mycket mRNA som är närvarande. Även andra mer kraftfulla tekniker finns fortfarande Northern blot standarden på grund av dess enkelhet och användarvänlighet. Norra blotting tekniken möjliggör också direkt jämförelse av flera prov i ett enda experiment.

budbärar-RNA är en typ av nukleinsyra som bildas när en gen uttrycks. En gen som är påslagen och funktionella inom en cell är transkriberas till mRNA. Den mRNA sedan transporteras in i cytoplasman i cellen, där det översätts till ett protein. Northern blot analys av det cellulära mRNA prov kan därför ge värdefull information om den mängd proteiner cellen producerar. I norra blot är mRNA extraheras från cellerna och gå igenom en denaturering agarosgelelektrofores, som tillåter mRNA i provet som skall separeras beroende på storlek. Prover på mRNA-molekyler av kända storlekar körs samtidigt för att ge en kontroll. När elektrofores är klar, är proverna överförs och immobiliserade på en fast membran, vanligtvis tillverkade av ett material som nylon. Proven skall därefter utsätts för radioaktivt märkt sonder i flera timmar före analys. Under analysen, mRNA som hybridiseras till en radioaktivt märkt sond klart kan påvisas med röntgen. Den norra blotting tekniken möjliggör observation av mönster genuttryck mellan olika typer av vävnad. Budbärar-RNA extraheras från cellerna i olika vävnader och organ typer kan jämföras, och cellulära reaktioner på stress, infektion, och många andra stimuli kan granskas. Genom att titta på skillnader i mRNA uttryck under olika förhållanden, kan en forskare bestämma vilka typer av proteiner i en cell producerar som svar på vissa stimuli. Detta kan ge ledtrådar om funktioner okända proteiner, eller i fallet med kända proteiner, information om cellulära svar på stimuli i fråga.

Till exempel kan en Northern blot visar att uttrycket av ett okänt protein ökar till följd av förekomsten av ett specifikt toxin. Det skulle då vara teori att proteinet är involverat i att minska toxicitet, kanske genom att transportera ut kemikalien ur cellen eller omvandla den till en metabolit. Om känd proteiner är under prövning, dokumentera förändringar i protein uttryck kan ge information om svaret själv. Om uttryck för en känd molekylär transportör har höjts, till exempel, kan det bekräftas att det cellulära svaret på toxinet är att transportera giftet ut ur cellen.


Kommentarer

  • Om oss
  • Reklam
  • Kontakta redaktören
  • Få nyhetsbrev
  • RSS-feed

Redaktör: Beáta Megyesi
Nyheter redaktör: Christiane Schaefer

Kundservice: Mats Schaefer,
Helena Löthman

Tel: +46 00 79 22 00
Fax: +46 00 79 22 01

© Copyright 2014 Debok.net - All rights reserved.