Vad är en Southern Blot?

Southern blot är en teknik som används för att detektera DNA i ett prov, och avgöra hur mycket DNA är närvarande. Detta förfarande är döpt efter Edwin Southern, en brittisk biolog och pionjär tekniken på 1970-talet. Southern blot analys används gelelektrofores för att separera DNA-fragment i ett prov och sedan använder prober för att detektera DNA-sekvenser av intresse.

Southern blotting börjar med ett urval av DNA som har utvunnits ur celler. Det DNA behandlas med restriktionsenzym att klyva nukleinsyran i fragment av olika storlekar. Därefter är det DNA gå igenom en denaturering agarosgelelektrofores. Denna process skiljer fragmenten i separata delar samtidigt som de också separeras efter storlek.

Nästa steg i södra blot är att överföra det separerade DNA fragment till ett blad av nylon eller nitrocellulosa, som innehar fragmenten orörliga. Efter detta arket inkuberas med en Hybridiseringssond av enstaka DNA. Sekvensen av sonden är utformad så att den binder till DNA-sekvens som försöket försöker upptäcka. Varje sond fragment binder de kompletterande DNA sekvens om den finns i provet, att bilda en del av dubbelsträngat DNA. Sonden är märkt med en radioaktiv isotop, eller med ett enzym. Flera prober kan användas i samma experiment. När inkubering är klar, det sista steget i Södra blot processen är att upptäcka platser där sonden har bundits till kompletterande DNA. Om sökningen var märkt med en radioaktiv isotop, görs detta med hjälp av röntgenbilder för att upptäcka platser där sonden har hybridiseras till fragment prov DNA. När ett enzym används ytterligare en inkubering sker. Det enzym som används för detta ändamål är en som ger en färgad produkt när den reagerar med substrat, så Southern blot kompletteras genom substratet för att visa platser där sonden DNA har bundits till exempel DNA.

Southern blotting är användbara för olika skäl. Den enklaste användningen av tekniken är att använda en sond för att identifiera DNA-sekvenser som är av intresse, eller som måste isoleras för andra ändamål. Southern blotting används också för att avgöra hur många kopior av en viss sekvens finns i ett prov. Detta är möjligt eftersom en starkare radioaktiva eller enzymatiska signal produceras när flera exemplar av en sekvens är närvarande och bundna till sonder.

En annan vanlig användning av tekniken är i genmanipulation av bakterier och andra mikroorganismer. I detta fall bakteriellt DNA är sökt för att avgöra om främmande DNA har framgångsrikt införts i bakterien. Southern blotting är också grunden för den begränsning fragment length polymorphism teknik.


Kommentarer

  • Om oss
  • Reklam
  • Kontakta redaktören
  • Få nyhetsbrev
  • RSS-feed

Redaktör: Beáta Megyesi
Nyheter redaktör: Christiane Schaefer

Kundservice: Mats Schaefer,
Helena Löthman

Tel: +46 00 79 22 00
Fax: +46 00 79 22 01

© Copyright 2014 Debok.net - All rights reserved.